發(fā)布時(shí)間：2015/12/07 新聞?lì)^條 瀏覽次數(shù)：10
姜平，博士，教授，南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院預(yù)防獸醫(yī)學(xué)系主任，農(nóng)業(yè)部動(dòng)物細(xì)菌學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室主任，國家生豬產(chǎn)業(yè)體系豬病防控崗位專家。先后主持國家和部省級(jí)研究課題25項(xiàng)。研究領(lǐng)域涉及畜禽重要疫病病原分子流行病學(xué)、致病機(jī)理、診斷和免疫研究。
近年來，圓環(huán)病毒疫苗研究已經(jīng)有比較大的突破，圓環(huán)病毒疫苗雖然有所普及但程度還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。根據(jù)目前國內(nèi)生豬養(yǎng)殖狀況預(yù)測(cè)，規(guī)?；i場(chǎng)全部使用圓環(huán)病毒疫苗的話應(yīng)該能達(dá)到2.5億頭份的市場(chǎng)容量，但現(xiàn)在（2013年數(shù)據(jù)）實(shí)際上只有1.5億頭份，使用豬場(chǎng)還不夠多。
圓環(huán)病毒的危害除了仔豬斷奶綜合癥、母豬繁殖障礙等之外，也有很嚴(yán)重的免疫抑制。目前臨床上豬群亞健康狀況非常普遍，感染圓環(huán)病毒免疫力降低，但是沒有造成嚴(yán)重的發(fā)病死亡。PCV2a和PCV2b混合感染增多，致病力加強(qiáng)，以前注射疫苗能夠抵抗得住，現(xiàn)在抵抗不住發(fā)病了，這是一個(gè)新的動(dòng)態(tài)。還有一個(gè)變化是豬群發(fā)病日齡推遲，原來在保育舍發(fā)病，現(xiàn)在推遲到了育肥舍100日齡左右。繼發(fā)細(xì)菌感染增多，存在和藍(lán)耳病一樣的免疫抑制問題。
亞型間混合感染可能使致病力增強(qiáng)，發(fā)病日齡推遲
圓環(huán)病毒也有基因變異問題，世界公認(rèn)的分型有PCV2a、PCV2b和PCV2c，主要起致病作用的還是PCV2b，目前國內(nèi)還沒有發(fā)現(xiàn)PCV2c。去年美國發(fā)現(xiàn)圓環(huán)病毒新的流行動(dòng)向。在美國，圓環(huán)病毒免疫密度高達(dá)95%，但還是有很多豬場(chǎng)發(fā)病。調(diào)查結(jié)果顯示，很多病例是PCV2a和PCV2b混合感染，因此美國學(xué)者推測(cè)是不是混合感染的原因，使得圓環(huán)疫苗的保護(hù)降低了。這是未來要研究的內(nèi)容方向之一。另外，一些打了圓環(huán)病毒疫苗的豬場(chǎng)發(fā)病，剖檢發(fā)現(xiàn)肺臟病變和以前不一樣，原來主要是肺部塌陷、彈性降低，新出現(xiàn)的臨床表現(xiàn)為肺水腫型，這種情況國內(nèi)也非常多。國外對(duì)這種現(xiàn)象進(jìn)行監(jiān)測(cè)，初步認(rèn)為基因變異不致于造成這種變化，但是確切原因還沒找到。圓環(huán)病毒病國內(nèi)的流行情況，根據(jù)我們實(shí)驗(yàn)室的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，2002年以后基本都是PCV2b在致病，尤其最近這兩年免疫后豬場(chǎng)發(fā)病的情況也發(fā)現(xiàn)PCV2a和PCV2b混合感染增多了。還發(fā)現(xiàn)一些和其他病原的混合感染，包括PCMV和TTV2，圓環(huán)病毒防控還是有一定復(fù)雜性。
研究人員還發(fā)現(xiàn)，圓環(huán)病毒病發(fā)病日齡有所推遲，發(fā)病時(shí)間從原來45-85日齡現(xiàn)在推遲到70-140日齡。臨床上還是會(huì)出現(xiàn)一些僵豬、腎臟發(fā)灰、發(fā)黃的情況。PMWS發(fā)病的原因首先的PCV2感染，其次還有一些環(huán)境誘因，涉及飼養(yǎng)管理、免疫應(yīng)激和混合感染。
2010年以前，國內(nèi)沒有圓環(huán)病毒疫苗的時(shí)候，控制圓環(huán)病毒病主要是20天60條計(jì)劃，哺乳期做幾條、保育期做幾條，都是綜合性防御措施。疫苗出來以后，怎么使用好疫苗，預(yù)防3周齡仔豬感染是個(gè)關(guān)鍵。如果仔豬在3周齡哺乳期感染病毒量大的話，即使當(dāng)時(shí)不發(fā)病，到了70-80日齡就會(huì)開始發(fā)病，所以要做好這個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)的免疫。一是母豬免疫，二是仔豬2-3日齡免疫，要求免疫抗體產(chǎn)生要快?，F(xiàn)在發(fā)病日齡推遲，又要要求疫苗的免疫持續(xù)期要長。根據(jù)圓環(huán)病毒新的流行變化趨勢(shì)和免疫反應(yīng)的要求，從仔豬3周齡產(chǎn)生抗體，到易發(fā)病的140日齡，全程要求抗體要高，產(chǎn)生抗體要早，持續(xù)時(shí)間要長，這對(duì)疫苗產(chǎn)生提出了更高的要求。
不同毒株間交叉保護(hù)較好，不同生產(chǎn)廠家質(zhì)量控制影響疫苗質(zhì)量
目前，國外豬圓環(huán)病毒疫苗有亞單位疫苗和全病毒疫苗兩種，臨床效果好，免疫密度可達(dá)到50%-90%。目前國產(chǎn)圓環(huán)病毒疫苗只有全病毒滅活疫苗，五個(gè)毒株分別是SH、LG、DBN-SX07、WH和ZJ/C。疫苗使用的種毒決定了免疫原性的好壞，但國內(nèi)這些毒株其實(shí)基本都是一樣的，除了LG是PCV2a，其他幾個(gè)都是PCV2b。毒株差別不大，不同廠家的生產(chǎn)質(zhì)量還是有差別的。
疫苗質(zhì)量控制的關(guān)鍵在于原料控制、工藝控制、半成品控制和成品控制。
原料控制主要包括種毒、細(xì)胞系和血清等。理論上講豬圓環(huán)病毒各亞型之間都有較好的交叉保護(hù)。但是據(jù)2012年美國的一篇研究報(bào)道介紹，PCV2b的免疫效果要優(yōu)于PCV2a。細(xì)胞系是病毒賴以生存的環(huán)境，篩選最適合該病毒生長的專用細(xì)胞，可以使病毒滴度提高100倍。南京農(nóng)業(yè)大學(xué)研究團(tuán)隊(duì)研發(fā)的豬圓環(huán)病毒高滴度病毒培養(yǎng)專用細(xì)胞已經(jīng)獲得國家專利，普通細(xì)胞培養(yǎng)豬圓環(huán)病毒滴度只能達(dá)到104-105，專利細(xì)胞就能達(dá)到106以上。
病毒滴度是全病毒滅活疫苗抗原含量的一種表示方法，但是病毒滴度的測(cè)定方法很重要，不同測(cè)定方法、方法標(biāo)準(zhǔn)不標(biāo)準(zhǔn)對(duì)結(jié)果影響差異很大。病毒滅活后抗原性會(huì)發(fā)生一定改變，通過我們實(shí)驗(yàn)室的研究發(fā)現(xiàn)，單克隆抗體夾心ELISA可以用于疫苗生產(chǎn)過程中病毒抗原的檢測(cè)，以便控制疫苗成品的質(zhì)量，比其成品質(zhì)量時(shí)采用普通ELISA或者其他方法測(cè)定更為及時(shí)可靠。
但是病毒滴度TCID50不能絕對(duì)的來反映疫苗的免疫源性，疫苗的免疫源性用最小免疫劑量來衡量更科學(xué)。TCID50越高，不代表抗原免疫源性就越好。比如TCID50是108，最小免疫劑量是107，那么這個(gè)疫苗的免疫源性就不夠高。如果TCID50同樣是108，但最小免疫劑量只有105，那么后面這個(gè)疫苗的免疫源性明顯要比前者好。病毒滴度和最小免疫劑量之間差距可以反映種毒的品質(zhì)。
為了提高疫苗的抗原含量，除了使用專利細(xì)胞系培養(yǎng)，增加病毒滴度，還可以采用懸浮培養(yǎng)等先進(jìn)生產(chǎn)工藝。目前懸浮培養(yǎng)新技術(shù)主要應(yīng)用在口蹄疫疫苗的生產(chǎn)，技術(shù)相對(duì)成熟，其他疫苗的應(yīng)用技術(shù)還在探索和研究。復(fù)合抗原以及重組蛋白表達(dá)抗原也是未來豬圓環(huán)病毒疫苗研發(fā)的重要方向，既有亞單位抗原又有全病毒抗原混合在一起，可以提高抗原含量。
滅活工藝對(duì)抗原含量影響同樣很重要。一般說明書所指的TCID50值都是疫苗滅活前的病毒滴度，但如果滅活過程處理不好，會(huì)造成抗原含量的減損。常用滅活劑有甲醛、BEI、BLP等。除了選擇適當(dāng)?shù)臏缁顒€要嚴(yán)格滅活檢驗(yàn)。滅活后在細(xì)胞連續(xù)傳代3代，檢查滅活效果。
此外，免疫佐劑對(duì)疫苗質(zhì)量也有一定影響。目前，所有國產(chǎn)圓環(huán)疫苗都采用油性佐劑，因此，仍有一定副作用。豬用水性佐劑是未來豬圓環(huán)病毒疫苗研發(fā)的重要方向。
圓環(huán)疫苗成品檢驗(yàn)方法有待改進(jìn)，免疫兩次效果較好
仔豬攻毒保護(hù)試驗(yàn)和小鼠參考疫苗檢驗(yàn)系統(tǒng)是目前國內(nèi)唯一經(jīng)過農(nóng)業(yè)部認(rèn)證的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，也是國際通用的參考標(biāo)準(zhǔn)。小鼠抗體免疫試驗(yàn)中，將免疫待檢疫苗小鼠產(chǎn)生的抗體水平與免疫參考疫苗小鼠產(chǎn)生的抗體相比較，高于參考疫苗的為合格，否則為不合格。參考疫苗是指通過豬體免疫試驗(yàn)，檢驗(yàn)合格的疫苗產(chǎn)品。目前，有些國產(chǎn)圓環(huán)疫苗質(zhì)量檢驗(yàn)采用仔豬攻毒保護(hù)試驗(yàn)，試驗(yàn)豬的標(biāo)準(zhǔn)有待規(guī)范和提高。
豬圓環(huán)疫苗使用效果的臨床評(píng)價(jià)不能只談保護(hù)率，除了死亡率和發(fā)病率，還包括提高豬群的生長速度、整體均勻度、降低料肉比、減少細(xì)菌感染和減少疾病治療成本等生產(chǎn)指標(biāo)。
圓環(huán)疫苗的免疫一般打兩次比較好，有些進(jìn)口產(chǎn)品采用新型水性佐劑，緩釋效果較好可以打一針，一般國產(chǎn)疫苗打一次的效果不如打兩次。尤其是當(dāng)前發(fā)病日齡推遲的情況下，第二次疫苗免疫可以激發(fā)第一次的免疫效果，免疫期持續(xù)更長。如果母豬接種過圓環(huán)病毒疫苗，小豬首免建議在3-4周齡，如果母豬沒有免疫，則小豬在2周齡接種疫苗免疫，以確保在3周齡產(chǎn)生免疫力。
母豬圓環(huán)病毒病的發(fā)病特點(diǎn)是懷孕早期感染，主要是第一胎母豬和第二胎母豬，對(duì)高胎齡母豬來說影響不大，因此我不建議“一刀切”普免。“一刀切”不但浪費(fèi)疫苗，而且也容易引起母豬應(yīng)激，造成損失。我建議豬圓環(huán)病毒免疫方案為：第一胎、第二胎母豬配種前打，免疫2次，每次2毫升，間隔三周。經(jīng)產(chǎn)母豬產(chǎn)前5-6周，免疫疫苗2毫升，間隔三周加強(qiáng)免疫，保護(hù)小豬。母源抗體有時(shí)會(huì)影響仔豬打疫苗的效果。此外，圓環(huán)疫苗可以和藍(lán)耳病疫苗、氣喘疫苗或豬瘟疫苗一起打，可以減少免疫次數(shù)和免疫應(yīng)激反應(yīng)。
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